QPCR(定量聚合酶链反应)的程序设置主要取决于实验的需求,包括引物和探针的特性、所需检测的基因类型以及实验目的。以下是一些常见的QPCR程序设置方法:
常规qPCR程序
变性:95℃, 10分钟
变性:95℃, 15秒
退火:60℃, 30秒
延伸:72℃, 30秒
循环次数:通常设定为40次
特殊用途的程序
长链RNA逆转录:
25℃, 5分钟
42℃, 1小时
70℃, 5分钟
microRNA逆转录:
在miRNA 3’末端加An
使用E. coli Poly(A) Polymerase:NEB M0276S
熔解曲线分析:
94度几分钟
骤冷到65度(假定65度为退火温度)
建议
选择合适的程序:根据实验需求选择合适的qPCR循环程序,如常规qPCR或特殊用途的程序(如逆转录、熔解曲线分析等)。
优化反应条件:根据引物和探针的特性调整退火温度、延伸时间等参数,以获得最佳的实验结果。
验证程序:在正式实验前,先进行预实验,验证所选程序的可行性和重复性。
希望这些信息对你有所帮助。