pcr扩增程序怎么设置

时间:2025-01-17 21:07:33 游戏攻略

PCR(聚合酶链反应)扩增程序的设置通常包括以下关键步骤:

启动PCR仪

打开PCR仪的电源开关。

准备PCR离心管

将PCR离心管的顶盖向上扳,再往前推,露出放样孔。

在放入PCR管前,确保反应体系各组分已加好。

放入PCR离心管后,盖好顶盖。

新建PCR程序

按F2键“Create”新建一个扩增的PCR程序。

使用控制台面的上下左右方向键移动编辑位置,输入所需的温度、时间、循环数等参数。

输入反应体积

根据PCR离心管中加入的反应体积总量,在“Reaction volume”后输入相应数值。

选择合适的体积档位,如Std“1~100ul”或9600“1~50ul”。

启动扩增

按F1键“Start”启动PCR扩增。

监控扩增过程

按“INFO”键查看PCR扩增信息。

扩增完成后,按台面左方的“Stop”键退出。

查看历史记录

按“Hist”键查看上次扩增的历史记录。

具体参数设置

变性温度:通常在94-98℃之间,时间1-3分钟,以解离DNA双链。

退火温度:根据引物的设计和模板的GC含量,通常在50-60℃之间,时间30秒至1分钟。

延伸温度:通常在72℃左右,时间1分钟,具体根据引物长度和DNA聚合酶活性调整。

循环数:通常在20-40次之间,具体根据扩增需求和模板复杂性调整。

特殊PCR程序

降落PCR(Touchdown PCR):退火温度从比引物Tm值高5-10℃开始,每个循环逐步降低退火温度,以提高特异性。

两步法PCR:适用于GC-rich片段,退火延伸温度设置为68℃,时间为退火和延伸的总时间。

注意事项

确保PCR仪的使用环境条件和对电源的要求符合要求。

打开PCR仪机盖时要轻,防止损坏机锁。

PCR基因扩增仪工作时严禁打开机盖。

通过以上步骤和参数设置,可以有效地进行PCR扩增,获得所需的DNA片段。